Duc de les Mosques El duc tus mosques normals i mosques que ataquen al seu voltant i flota voltant per la pantalla, mentre rebota per les parets. Rep una gran quantitat de knockback de les llàgrimes d'Isaac. El duc de les mosques tus les mosques normals per defensar-se i ho seguirà fent si el teu continues destruint-les. Aquestes mosques creen en un cercle al seu voltant. Quan arriva al límit de mosques al seu voltant, les pot exuplsar en direcciño al jugador. Una vegada que tingui suficients mosques defensives, procedirà a tossir mosques que ataquen, són més fortes i ataquen al jugador.
Monstro Monstro bàscament té habilitats, o escup una ràfega de trets de sang, o salta on hi ha el jugador, juntament amb projectils de sang disparats en totes les direcció quan colpeja el terra.
Larry Jr Larry Jr. sempre està amb un duplicat, i s'arrossegarà ràpidament al voltant de l'habitació, deixant rere seu munts de cagallons. Larry Jr. té un patró de moviment erràtic, aparentment no dirigides a Isaac. També té diversos segments, i tots han de ser destruïts per matar al cap. La destrucció del cap farà que el segment anterior es converteixi en un cap, i així successivament fins que tots els segments siguin destruïts. Un segment que no està connectat a cap altre segments (a causa que el segment mitjà s'ha destruït) morirà a l'instant, el que fa la lluita més fàcil per als personatges amb poc mal.
Femine Per derrotar Famine, no has de deixar de moure't, ja que dispara 3 boles de sang de la seva boca, en diagonal cap amunt i avall, i en la teva direcció. En la primera fase, Famine vola ràpidament en el seu cavall de pal, donant una volta a la pantalla, si et poses endavant d'ell, Famine donarà un crit aterridor i farà un atac de càrrega. Aquests atacs de càrrega destrueixen a les mosques que hi ha al camí, pel que pot ser una estratègia efectiva. En la segona fase, el cap abandonarà la muntura i atacarà directament al jugador.
Gurdy L'Atac bàsic de Gurdy és disparar 5 trets a la vegada, en 3 direccions diferents. Això s'indica en el moment en el que ficar el cap a l'interior del cos. Gurdy també pot convocar mosques periòdicament per atacar. En ocasions, també invocarà mosques grosses, les quals amb més atac i resistència. Finalment, pot invocar a dues Boils (que pot ser substituït per un Gut o Sack) alhora davant d'ella, que ho assenyala aixecant els braços. Per matar-la més fàcil pots parar-te darrere d'ell, ja que no pot atacar-te directament.
Mom

Mom té 4 parts bàsiques:

El Peu de la Mare: Atac principal de la Mare, que s'utilitza quan Isaac no està a prop dels límits del mapa. Fa mal en un radi d'aproximadament equivalent a l'ombra que projecta abans de contactar. Aquest atac pot danyar altres enemics de l'habitació.

La mà de la Mare: Un atac alternatiu efectuat quan Isaac està massa a prop d'una porta. La mare deixa de trepitjar per un curt període, si s'utilitza aquest atac. No obstant això, aquest atac succeeix molt ràpidament i és molt més difícil d'esquivar que el peu.

L'ull de la Mare: Apareix periòdicament. L'ull no ataca o invoca enemics, oferint un curt període de temps perquè li puguis disparar.

La carn de la Mare: Un tros de carn apareixerà, i invoqués a un enemic al costat. La mare pot tenir fins a 4 enemics addicionals per ajudar-la a matar Isaac.
Mom's heart (el cor de la mare) El Cor de la Mare genera tres monstres i després desapareix. Després de matar els monstres, el cor torna a aparèixer en el centre del mapa durant 3-4 segons, genera més monstres, després desapareix de nou. Si t'ho fas per matar els monstres abans de dos segons de la seva fresa (abans que desaparegui el cor), el cor de la mare es quedarà a la pantalla i generés altres monstrous.
Satan

Satanàs sortirà de l'estàtua del centre de la habitació, cridant el nom d'Isaac. Satanàs té tres atacs: dispara 2 fileres de sang (primer 5 i després 4), llança un raig de sang de la seva boca, i dispara rajos de sang de les seves mans. Satanàs només fa aquests dos últims atacs si el jugador s'atura davant d'ell. Si la velocitat del personatge és baixa, llavors tens poca o cap possibilitat d'èxit.

Un mètode eficaç per derrotar-és anar molt per a l'esquerra o molt per la dreta (canvia de lloc si es posa massa a prop) i esquivar les seves bales de sang mentre tu li dispares. Tingues en compte que mentre ell aquesta disparant les seves bales de sang, serà incapaç de disparar els seus raigs de sang, pel que millor és canviar de costat.

Una altra tàctica és simplement córrer en semicercles al voltant de Satanàs, assegurant de no aturar-se mentre ell dispara bales de sang. Això funciona millor amb estadístiques d'alta Velocitat.

Segona Fase:

Després de treure-li tota la vida en el seu primer estat Satanàs volarà fora de la pantalla. Aquest atacara únicament trepitjant el terra de la mateixa manera que Mom. Trepitjarà contínuament amb eles seves 2.